COMBI-AD试验是一项双盲、随机、3期研究，评估达拉非尼联合曲美替尼的联合治疗对比安慰剂，用于已切除的BRAF V600突变III期黑色素瘤患者。其生物标志物分析是一项预先设定的探索性终点，并在ITT人群中进行。该生物标志物分析评估在III期黑色素瘤术后，ctDNA检测能否预测生存结局，从而识别出具有高复发风险和低复发风险的患者。其采用微滴数字化PCR（dd PCR）检测受试者 BRAF V600E或BRAF V600K ctDNA。比较了生存结局与基线ctDNA、TMB和干扰素γ（IFNG）基因表达之间的关联。

在870名患者中获得了597名患者的基线血浆样本，94名患者治疗开始后3个月、6个月、9个月和12个月的样本。此外，获得了118名患者在临床或影像学复发前后2个月内的样本。在597份基线样本中有79份（13%）检测到ctDNA。中位随访60月。

13%的患者基线ctDNA阳性。与ctDNA阴性的患者相比，基线ctDNA阳性的患者具有早期复发的高风险。就中位PFS而言，安慰剂组中ctDNA阳性者为3.71个月，而ctDNA阴性者为24.41个月，HR为 2.91。靶向药物治疗组中ctDNA阳性者为16.59个月，而ctDNA阴性患者为68.11个月，HR 2.98。 就中位OS而言，安慰剂组ctDNA阳性者为33.90个月，ctDNA阴性者未达到，HR 3.35。联合治疗组ctDNA阳性者为40.31个月，ctDNA阴性者未达到，HR 4.27。较高的ctDNA值与更短的RFS和OS的更高风险相关。

在靶向药物治疗组中高风险和低风险患者的RFS和OS均优于安慰剂组的患者，这证明了联合治疗的益处。ctDNA与生存结局的关联性强于IFNG基因表达或TMB。ctDNA分子学复发或持续阳性的患者的中位RFS（分别为8.31个月（95% CI 5.39-12.20） 和 5.32个月 （2.79-未达到），明显短于基线阳性后转为检测不到或持续不可检测的患者（分别为19.25个月 （16.39-未达到）和未达到 （38.44-未达到）。

研究表明采用ddPCR检测ctDNA技术在辅助靶向治疗前和随访期间评估MRD能够识别出具有早期复发高风险的患者。利用ctDNA检测来指导治疗干预，可能会改善已切除的III期黑色素瘤的管理（ Lancet Oncol. 2025 May;26(5):641-653. doi: 10.1016/S1470-2045(25)00139-1）。